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緩沖液常見的配置方法您都了解嗎?
發布時間:2021-11-25   點擊次數:11次
  緩沖液是一種能在加入少量酸或堿和水時大大減低pH變動的溶液.pH緩沖系統對維持生物的正常pH值和正常生理環境起到重要作用.多數細胞僅能在很窄的pH范圍內進行活動,而且需要有緩沖體系來抵抗在代謝過程中出現的pH變化.在生物體中有三種主要的pH緩沖體系,它們是蛋白質緩沖系統、重碳酸鹽緩沖系統以及磷酸鹽緩沖系統.每種緩沖體系所占的分量在各類細胞和器官中是不同的。
 
  緩沖液根據用途,一種是單純的HEPES+NaOH,另一種是HEPES+鹽。各種配制方法總結如下:
 
  一、500ml 1 M HEPES, pH = 7.0 Stock solution的配制
 
  119.15 g HEPES 溶解在400ml蒸餾水中,加0.5~1M 的NaOH水溶液調節至少所需pH(HEPES的有效pH 范圍是6.8~8.2),然后用蒸餾水定容至500ml,于4攝氏度保存。
 
  二、加少量鹽的HEPES Buffer配方(500ml)
 
  HEPES 6.5g、NaCl 8.0g、Na2HPO4.7H2O 0.198g、用0.5M NaOH 水溶液調節pH值,較后定容。
 
  三、2×HEPES緩沖鹽溶液的配制
 
  將1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2HPO4.2H2O、0.2g葡聚糖(glucan or dextran)和1g HEPES溶解在90ml的蒸餾水,用0.5M NaOH調節至所需pH值,再用蒸餾水定容至100ml即可。
 
  HEPES使用方法有兩種:
 
  (1)HEPES可按所需的濃度直接加入到配制的培養液中,再過濾除菌。每1000ml培養液中加入2.38克HEPES,待溶后用lN NaOH 調pH至7.2,濾過除菌后使用。此時HEPES的使用濃度為10 mmol/L。
 
  (2)亦可配成 100 x 貯存液(l mol/L),使用前取 99ml培養液加入 lml貯存液,較終應用濃度仍為10mmol/L。l mol/L(100 x)HEPES貯存液配制方法:取23.8g HEPES溶于90ml雙蒸水中,用lN NaOH調pH至7.5一8.0,然后用水定容至100ml,過濾除菌,分裝小瓶(2ml/瓶),4℃或-20℃保存。
 
  需要注意的是,HEPES緩沖液的使用終濃度為10-50mmol/L,對細胞無毒性作用。一般情況下,濃度為20mmol/L的HEPES即可達到緩沖能力。

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